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軒澤康生物帶你手把手做實驗(實驗操作二)

來源: 上海軒澤康生物有限公司 >> 進入該公司展臺 2023/04/13 15:26:47 已瀏覽:
導讀:超詳細的為您介紹酶聯免疫吸附實驗ELISA的實驗所需試劑以及詳細的步驟。做ELISA的同學快來學習吧~

酶聯免疫吸附實驗實驗操作(二)

1:再每個EP管中加入150ul標準品稀釋液,更換槍頭后在1號管中加入150ul標準品。更換槍頭并將EP管用混勻儀混勻5秒

2:在1號管中吸取150ul加入2號管中,更換槍頭并將EP管用混勻儀混勻5秒。在2管中吸取150ul加入到3號管中,以此類推

3:【加樣】:移液器調至50ul,標準品每個濃度點2個孔,每孔加入50ul。(加樣過程中注意更換槍頭)多道移液器調至40ul,樣本孔中每孔加入40ul樣本稀釋液;更換10ul移液器和槍頭,樣本孔中每孔加入10ul樣本(空白孔中不加入任何液體)(上海軒澤康生物溫馨提示:加樣時間盡量控制在15分鐘之內完成,避免造成前后孔反應時差。)

4:【孵育及洗滌):封上封板膜并輕輕搖晃酶標板,標記項目及時間后置入37℃恒溫箱中孵育30分鐘。孵育結束后取出酶標板。

5:【洗滌】:將洗滌液倒入容器中,小心揭掉封板膜。棄去液體并在吸水紙上拍干。準備200ul多道移液器,每孔加200ul洗滌液,靜置30秒后棄去液體。重復洗滌、靜置、棄液步驟5次并拍干酶標板。

6:【加酶】:每孔加入酶標試劑50ul(空白孔除外),封上封板膜并輕輕搖晃酶標板,標記項目及時間后置入37℃恒溫箱中孵育30分鐘,孵育結束后取出酶標板。小心揭掉封板膜,棄去液體。

7:【洗滌】:每孔加200ul洗滌液,靜置30秒后棄去。重復洗滌、靜置、棄液步驟5次。在吸水紙上拍干剩余液體。

8:【顯色】:將底物A、B分別倒入容器中.每孔加入50ul底物A,更換槍頭后每孔加入50ul底物B。封上封板膜并輕輕搖晃酶標板,標記項目及時間后置入37℃恒溫箱中避光孵育10分鐘.孵育結束后取出酶標板。小心揭掉封板膜。

此時酶標板應有成梯度的可見色差

9:【終止】:終止液倒入容器中,每孔加終止液50ul進行終止反應。此時酶標板內液體由藍色轉變?yōu)辄S色,輕輕搖晃酶標板后待用。

10:【測定讀數】:酶標板放入酶標儀進行檢測,以空白孔調零450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)

測定應在加終止液后15分鐘以內進行。軒澤康生物帶你手把手做實驗(實驗操作二)

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