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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
1.定性測定
(1)ELISA試劑盒陽性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般為陰性對照的平均A值加一個常數(shù),試劑制備嚴格標(biāo)準化,要先計算出陽性對照A值平均數(shù)和陰性對照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽性。
(2)抑制率法:在競爭抑制法中結(jié)果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A陰性對照A-A待測)/陰性對照X100%,一般以抑制率≥50%為陽性試劑盒。
2.半定量測定
結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后,進行ELISA檢測,在陽性臨界值以上的稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度”。
3.定量測定
即用己知量的標(biāo)準品作一系列稀釋后進行ELISA試劑盒測定,與待測標(biāo)本同時進行測定,繪制標(biāo)準曲線,結(jié)果以*量或活性單位表示之。
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