一、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(注意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點酒精放到凈工作臺里。

2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。

4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。

5.根據(jù)細胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。

二、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

3.加適當?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。

4.細胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

5.用移液槍吹打細胞，讓細胞懸浮起來。

6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。

8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

三、凍存
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃*，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制:70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。